Wat is het doel van de PCR-productzuivering?
Wat is het doel van de PCR-productzuivering?

Video: Wat is het doel van de PCR-productzuivering?

Video: Wat is het doel van de PCR-productzuivering?
Video: REGEN-Cov™/Ronapreve®, wat is dat en hoe werkt het? 2024, November
Anonim

Zuivering van DNA van a PCR reactie is typisch nodig voor stroomafwaarts gebruik en vergemakkelijkt de verwijdering van enzymen, nucleotiden, primers en buffercomponenten. Traditioneel werd dit bereikt met behulp van organische extractiemethoden, zoals extractie met fenolchloroform, gevolgd door ethanolprecipitatie.

De vraag is ook, waarom is het nodig om PCR-producten te zuiveren?

Jij moet PCR-producten zuiveren om ongebruikte primers, nucleotiden en enzymen kwijt te raken om het succes van ligatie te optimaliseren, waardoor de Product van PCR . Tot zuiveren de PCR-producten , wordt grootte-uitsluitingschromatografie gebruikt.

Bovendien, wat moet ik doen na PCR? Om het herstel te maximaliseren, spoelt u de retentaatbeker tweemaal met 10 tot 20 µL TE of water. De laatste PCR reactie kan tot een microgram geamplificeerd DNA bevatten dat kan worden gebruikt voor een verscheidenheid aan moleculair-biologische toepassingen. Deze toepassingen kunnen min of meer gevoelig zijn voor de resterende componenten van de PCR reactie mengsel.

Je kunt je ook afvragen, hoe maak je PCR-producten schoon?

Klassieke methoden die worden gebruikt om schoon omhoog PCR-producten voorafgaand aan sequencing omvatten gelelektroforese, ethanolprecipitatie en kolomchromatografie. Hoewel vrij effectief, kunnen deze methoden snel omslachtig worden bij het parallel verwerken van meerdere monsters en verschillende mate van monsterverlies vertonen.

Waarom moet het DNA worden schoongemaakt?

We schoon omhoog DNA uit waterige oplossingen om bufferzouten, enzymen of andere stoffen te verwijderen die van invloed kunnen zijn op downstream-toepassingen. Voorbeelden zijn onder meer PCR-reactie schoon omhoog, schoon omhoog na restrictiedigesten en schoon up van genomisch of plasmide DNA verontreinigd met cellulaire eiwitten/puin.

Aanbevolen: