Hoeveel kost het om een ligatie te transformeren?
Hoeveel kost het om een ligatie te transformeren?

Video: Hoeveel kost het om een ligatie te transformeren?

Video: Hoeveel kost het om een ligatie te transformeren?
Video: De nieuwste methoden om aambeien te behandelen 2024, November
Anonim

transformatie . Voeg tussen 1-5 µl toe afbinding mengsel naar competente cellen voor transformatie . Verlengd afbinding met PEG veroorzaakt een drop-off in transformatie efficiëntie (Snel Ligatie pakket). Elektroporatie wordt aanbevolen voor grote constructies (> 10.000 bp).

Hiervan, hoeveel ligatieproduct heb ik nodig voor transformatie?

transformatie . Voeg tussen 1-5 µl toe afbinding mengsel naar competente cellen voor transformatie . Verlengd afbinding met PEG veroorzaakt een drop-off in transformatie efficiëntie (Snel Ligatie pakket). Elektroporatie wordt aanbevolen voor grote constructies (> 10.000 bp).

Vervolgens is de vraag, wat is Ligatie en Transformatie? In een typisch kloneringsexperiment voegen onderzoekers eerst een stuk DNA, zoals een gen, in een cirkelvormig stuk DNA dat een plasmide wordt genoemd. Deze stap maakt gebruik van restrictie-enzymen en DNA-ligase en wordt a. genoemd afbinding . Na een afbinding , is de volgende stap om het DNA in bacteriën over te brengen in een proces dat transformatie.

Vervolgens kan men zich ook afvragen, hoeveel DNA is er nodig voor een ligatie?

De algehele concentratie van vector + insert moet tussen 1-10 g/ml zijn voor een efficiënte afbinding . Vector:Inzet molverhoudingen tussen 1:1 en 1:10 worden aanbevolen (1:3 is typisch). Als u niet zeker bent van uw DNA concentraties, voer meerdere ligaties uit met verschillende verhoudingen.

Hoe lang kun je een ligatiereactie bewaren?

Ligaties kunnen worden gedaan bij kamertemperatuur of koeler (denk aan 12-16°C) 's nachts of zelfs voor een paar dagen, als jij ben erg druk. Jij kan ook een ligatie opslaan in de koelkast en haal het er later uit om het afbinden bij kamertemperatuur zo lang mogelijk te laten doorgaan lang als nodig.

Aanbevolen: