Zijn er andere methoden om PCR-producten te zuiveren?
Zijn er andere methoden om PCR-producten te zuiveren?

Video: Zijn er andere methoden om PCR-producten te zuiveren?

Video: Zijn er andere methoden om PCR-producten te zuiveren?
Video: Sabine Pinedo: ‘Pak deze 10 beïnvloedbare risicofactoren aan om gezonder te worden‘ 2024, November
Anonim

Voor die toepassingen die vereisen: PCR opschonen of valideren van PCR resultaten, daar zijn twee methoden algemeen gevolgd: PCR-product isolatie met behulp van een kolom, en gel zuivering van een agarosegel.

Welk type chromatografie wordt hierin gebruikt om PCR-producten te zuiveren?

Om de PCR-producten te zuiveren, wordt grootte-uitsluitingschromatografie gebruikt. Dit vangt kleine moleculen zoals eiwitten, primers , en nucleotiden, terwijl grote moleculen zoals PCR-producten te groot zijn om de kralen binnen te gaan en door de kolom in de verzamelbuisjes te gaan.

En hoe zuiver je DNA? In principe kan je zuiveren jouw DNA door uw cel- en/of weefselmonsters te lyseren met behulp van de meest geschikte procedure (mechanische verstoring, chemische behandeling of enzymatische vertering), de nucleïnezuren te isoleren van de verontreinigingen en deze te precipiteren in een geschikte bufferoplossing.

Bovendien, waarom zuiveren we PCR-producten?

Zuivering van DNA van a PCR reactie is typisch nodig voor stroomafwaarts gebruik en vergemakkelijkt de verwijdering van enzymen, nucleotiden, primers en buffercomponenten. Algemeen gebruikte methoden maken gebruik van spinkolommen die een silicamatrix bevatten waaraan DNA selectief kan worden gebonden in aanwezigheid van chaotrope zouten.

Waarom moet het DNA worden schoongemaakt?

We schoon omhoog DNA uit waterige oplossingen om bufferzouten, enzymen of andere stoffen te verwijderen die van invloed kunnen zijn op downstream-toepassingen. Voorbeelden zijn onder meer PCR-reactie schoon omhoog, schoon omhoog na restrictiedigesten en schoon up van genomisch of plasmide DNA verontreinigd met cellulaire eiwitten/puin.

Aanbevolen: